Guanidin thiokyanát 593-84-0 usnadňuje extrakci nukleotidů a peptidů z vnitřností zvířat

Guanidinthiokyanát | 593-84-0 | je silný proteinový denaturační prostředek. Je to bílý krystalický prášek, dráždivý a citlivý na světlo. Je rozpustný v ethanolu a vodě, s bodem tání 118℃. Guanidinthiokyanát se používá hlavně k denaturaci, lýze buněk a extrakce RNA a DNA. Je to běžná chemická složka pro extrakci nukleových kyselin.

Patent cn111500664a popisuje způsob extrakce nukleotidů a polypeptidů ze zvířecích vnitřností za použití guanidinthiokyanátu. Nukleotidy jsou sloučeniny složené z purinové báze nebo pyrimidinové báze, ribózy nebo deoxyribózy a kyseliny fosforečné, které jsou široce používány v medicíně, produktech pro matky a děti, koření a potravinářských přídatných látkách. Polypeptid je α- Sloučeniny tvořené aminokyselinami spojenými dohromady peptidovými vazbami jsou meziprodukty hydrolýzy bílkovin, které zahrnují různé oblasti lidských hormonů, nervů, buněčného růstu a reprodukce. Jejich význam spočívá v regulaci fyziologických funkcí různých systémů a buněk v těle, aktivaci příslušných enzymů v těle, podpoře propustnosti intermediární metabolické membrány nebo řízení transkripce DNA nebo ovlivnění syntézy specifických proteinů, případně produkují specifické fyziologické účinky.

Zvířecí vnitřnosti jsou bohaté na nukleotidy a peptidy, ale v současné době se extrakce nukleotidů a peptidů většinou provádí odděleně, což vede k plýtvání zdroji a složitým procesům. Guanidin thiokyanát je užitečný k extrakci nukleotidů a peptidů ze zvířecích vnitřností. Specifické metody jsou následující:

Nejprve omyjte vnitřnosti čerstvých zvířat, sceďte je, nakrájejte, poté rozmačkejte, přidejte deionizovanou vodu, abyste získali smíchaný roztok, poté přidejte roztok guanidinthiokyanátu do smíchaného roztoku, zavibrujte a dobře promíchejte a poté nechte stát. Poté se k němu přidá nosič obsahující oxid křemičitý, protože guanidinthiokyanát štěpí buňky a nukleotidy uvolněné z buněk se spojí s nosičem oxidu křemičitého. Vyjměte nosič obsahující oxid křemičitý, absorbujte a oddělte jej eluentem, abyste získali purifikované nukleotidy.

Poté se ke zbytkovému roztoku, ze kterého byl vyjmut nosič oxidu křemičitého, přidá roztok NaCl, směsný roztok se extrahuje, potom se přidá kompozitní proteáza, poté se provede mikrovlnná enzymatická hydrolýza, roztok enzymatické hydrolýzy se zahřeje ve vodní lázni centrifuguje se supernatant a po lyofilizaci se získá polypeptid.

Tato metoda využívá vlastnosti, že guanidinthiokyanát může zničit buněčnou strukturu a denaturovat protein. Dokáže nejen postupně extrahovat nukleotidy a peptidy, ale má také výhody jednoduché metody a vysoké účinnosti. Zároveň se také vyhne problému reakce mezi biochemickými činidly při přidávání biochemických činidel pro extrakci.